微生物薄膜過濾法的計數(shù)結果計算主要基于微生物限度檢測儀的濾膜上截留的微生物菌落數(shù),結合過濾體積和稀釋倍數(shù)進行推算,核心公式為:
CFU/mL=濾膜上菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)/過濾體積(mL)
具體計算步驟與注意事項如下:
一、計算步驟
菌落計數(shù)
培養(yǎng)結束后,統(tǒng)計濾膜上的菌落數(shù)。
關鍵要求:選擇菌落數(shù)在30-300之間的平板進行計數(shù),以確保結果準確性。若菌落數(shù)過多(如超過200個),需重新稀釋樣品并過濾。
確定稀釋倍數(shù)
若樣品在過濾前進行了稀釋(如將10mL樣品加入90mL無菌水中,稀釋倍數(shù)為10倍),需記錄稀釋倍數(shù)。
若未稀釋,稀釋倍數(shù)為1。
計算微生物濃度(示例)
過濾體積:100mL
稀釋倍數(shù):10倍
濾膜上菌落數(shù):124個
計算:
CFU/mL=100124×10=12.4CFU/mL若需計算每升樣品中的微生物數(shù)量,則乘以1000:
12.4×1000=12400CFU/L將菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù),再除以過濾體積(mL),得到每毫升樣品中的微生物數(shù)量(CFU/mL)。
二、特殊情況處理
菌落蔓延生長
若菌落蔓延成片,無法區(qū)分單個菌落,則該平板不宜計數(shù),需重新實驗。
稀釋級平行性要求
若同稀釋級兩個平板的菌落平均數(shù)不少于15,則兩個平板的菌落數(shù)不能相差1倍或以上,否則需重新實驗。
延長培養(yǎng)時間
霉菌、酵母菌培養(yǎng)時間可延長至5-7天,以充分生長并計數(shù)。
三、結果報告
報告內容
檢測方法(如薄膜過濾法)、樣品信息、培養(yǎng)條件(溫度、時間)、菌落數(shù)及結論(是否符合微生物限度標準)。
標準對比
根據藥典或行業(yè)標準(如中國藥典、美國藥典),判斷樣品是否合格。
示例:若標準要求每毫升樣品中微生物數(shù)量不超過100CFU,則上述計算結果(12.4 CFU/mL)符合標準。
四、操作要點
無菌操作
確保過濾、培養(yǎng)等環(huán)節(jié)無菌,避免污染。
濾膜選擇
根據微生物大小選擇合適孔徑的濾膜(如0.45μm)。
沖洗濾膜
使用無菌緩沖液沖洗濾膜,去除殘留雜質和微生物抑制劑。
培養(yǎng)基選擇
根據微生物類型選擇適宜的培養(yǎng)基(如營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基)。